真菌通用PCR試劑盒
產品內容:
成分 | 規(guī)格 |
2×Taq PCR Master Mix | 0.5ml |
超純水 | 1ml |
真菌通用 PCR 引物混合液 | 0.1ml |
真菌通用 PCR陽性對照(1×10E7 拷貝/μL) | 50ul |
使用手冊 | 1份 |
產品優(yōu)勢:
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2.產品經過精心優(yōu)化,分析靈敏度高,可以達到 100 拷貝/反應。
3.提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4.特異性高,引物是根據(jù)真菌通用 DNA 高度保守區(qū)設計,不會跟除此之外的其它 DNA 發(fā)生交叉反應。
5.本產品足夠 50 次 20 ?L 體系的 PCR 反應。
6.本產品只能用于定性實驗,不能用于定量。
7.本產品只能用于科研。
儲存條件及有效期:
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 24 個月。
自備試劑:
樣品 DNA
1. 如果有 N 個樣品,必須設置 N+2 個提取反應,多出的兩個中一個是 PC(樣品制備陽性對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10 ?L 真菌通用 PCR 陽性對照(1×10E7 拷貝/?L,本試劑盒提供)再加上一定量的水作為制備的陽性對照(加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取決于 所用試劑盒的要求)??梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ铡?/p>
2.用自選方法純化上述 N+2 個樣品的 DNA。本試劑盒跟市場上大多數(shù) DNA-提取試劑盒兼容。也可以選用本公司的核酸-提取試劑盒或免提取核酸釋放劑。
應用范圍:
常規(guī)PCR;T/A克??;菌落PCR鑒定。
PCR過程:
1.變性
當反應混合物加熱0.5至2分鐘至94°C時,發(fā)生變性。
由于 DNA 兩條鏈之間的氫鍵斷裂,形成單鏈DNA。
單條 DNA鏈現(xiàn)在充當合成其他 DNA鏈的模板。
2.退火
持續(xù)約20至40秒,反應溫度降至54至60℃。
在這種情況下,引物附著在模板 DNA的互補序列上。
引物序列是20-30個堿基長的單鏈 DNA或RNA片段。
它們充當 DNA生產的前體。
有兩個引物-正向引物和反向引物一一兩條分離的鏈以相反的方向延伸。
3.延伸
在此階段溫度升高至72至80攝氏度之間。
Taq聚合酶將堿基固定到引物的3'未端。結果,DNA從5'延伸至3'。
Taq聚合酶可以承受極-高的溫度。結果產生雙鏈DNA分子。
為了在短時間內獲得多個感興趣的 DNA序列,這三個過程需要進行20-40次。
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