產(chǎn)品介紹

登革熱快速檢測試劑盒（Panbio）

產(chǎn)品規(guī)格：25T/盒

預(yù)期作用：

Panbio登革熱快速檢測試劑盒是用來定性檢測人血清、血漿和全血中的登革熱病毒IgM和IgG抗體的方法。這方法能用來鑒別初次和二次感染。它僅能用來檢測具有臨床登革熱癥狀的病人的樣本。結(jié)果是假定陽性的，必須經(jīng)病毒分離、雙份血清分析、免疫組織化學(xué)檢測抗原或病毒核酸檢測證實(shí)有登革熱病毒感染。

原理：

在處理病人樣本時，登革熱特異性IgM和IgG抗體和包埋在橫過盒膜的兩條線上的抗-人IgM和IgG抗體相結(jié)合。膠態(tài)金復(fù)合物包含重組登革熱1~4型抗原被病人的IgM和IgG捕獲而顯現(xiàn)出粉紅色的線。設(shè)定一個對照程序來指示方法操作正確。

澳大利亞Panbio公司一直在登革熱（Dengue fever）、羅斯河熱（Ross river fever）的診斷試劑產(chǎn)品方面保持前列。公司的西尼羅河腦炎（West Nile encephalopalitis）診斷試劑在獲得美國FDA注冊。

警示

1.所有的人血產(chǎn)品都應(yīng)該按可能有傳染性的材料來處理。疾病預(yù)防控制中心和國家健康署建議可能傳染的抗原應(yīng)該在2級生物安全下進(jìn)行處理。

2.不要用嘴吸取液體，皮膚不要和試劑或病人樣本接觸。

3.嚴(yán)格按照操作規(guī)程才能得到Z佳的結(jié)果。試劑必須小心地加以保持實(shí)驗的準(zhǔn)確度和精確度。

4.超出操作規(guī)程時間和溫度范圍做試驗可能會導(dǎo)致無效的結(jié)果。沒有在即定的時間和溫度內(nèi)做試驗必須要重做。

5.試劑盒內(nèi)的成份是經(jīng)一批單位進(jìn)行質(zhì)量控制的。不同批號的產(chǎn)品不同混合使用。不要與其它制造商的產(chǎn)品混合。

6.小心使用，避免試劑污染。如果確實(shí)是有微生物污染或有沉淀，就不要使用。配試劑的儀器、容器或是試劑生物污染都可導(dǎo)致錯誤的實(shí)驗結(jié)果。

7.不要加熱失活的樣本。

8.試劑盒貯存在干燥的地方。

9.不要重復(fù)使用試劑盒。

10.如果箔袋有破損，試劑盒就不要使用。

11.試驗材料應(yīng)該按當(dāng)?shù)氐?、州?或國家法律來處理。

試劑的貯存方法和期限

1.試劑盒貯存在2~30°C，試劑要穩(wěn)定必須保持恒溫，直至失效。有效期參見包裝袋標(biāo)簽。

2.不要冷凍試劑。

3.在包裝袋上標(biāo)示的有效期內(nèi)試劑都可使用。

4.試劑超過有效期不能使用。

樣本收集和準(zhǔn)備

1. 靜脈血在室溫下（20~25ºC）會凝結(jié)成塊，然后根據(jù)全國臨床實(shí)驗標(biāo)準(zhǔn)委員會（NCCLS）（收集診斷靜脈血的認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)程序，H3-A4, 1998）進(jìn)行離心。

血清應(yīng)盡快分離并冷藏（2~8ºC）或是冷凍（-20ºC），如果在兩天內(nèi)不試驗的話，應(yīng)冷凍在更低的溫度下。黃疸血清、有溶血的、脂血的或是有細(xì)菌生長的血清都不推薦使用

2. 不推薦使用自我解凍的致冷機(jī)來貯存樣本，因為它能引起樣本經(jīng)過凍融周期和降低抗體水平，因此產(chǎn)生假結(jié)果。

3.指端血采集后要馬上測試。NCCLS建議含有EDTA或肝素作為抗凝劑的全血可以不經(jīng)離心就立即使用，或者也可以在2~8 ºC放上72小時（血樣處理加工的認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)程序，H18-A2, 1999）

4.發(fā)熱開始后樣本的采集時間決定了試驗的準(zhǔn)確度。在發(fā)熱開始后的6~14天采得的樣本能得到Z佳的結(jié)果。

試劑盒組成

每個試劑盒包括下面的東西，數(shù)量足夠能完成包裝袋標(biāo)簽上標(biāo)明的測試份數(shù)。

•25小包。每包里面有一個試劑盒和一個10µL的MicroSafe®移液管。

•1份使用說明書。

•1管3ml的緩沖液（含有0.1% Proclin）

必要的但不提供的材料

•計時器

一般程序

MicroSafe®移液管的操作方法

MicroSafe®移液管能用來吸全血、血漿或血清。

在吸液時請嚴(yán)格遵照下面的使用說明（圖1）：

1.水平地拿著移液管。

2.吸液時，移液管的*和測試樣本接觸（見下圖1）。

3.輕輕地擠泡排出樣本。

注意：在吸液時，不要擠泡；它會自動充滿的。

測試程序：

注意：在開始實(shí)驗前確保所有的試劑平衡至室溫（20-25°C）。

要用時，才從袋內(nèi)拿出試劑盒和MicroSafe®移液管。

. 用微量移液器或是提供的MicroSafe®移液管在圓孔內(nèi)加入10µL的全血、血清或血漿。

. 讓樣品*吸收融入圓孔里的樣品墊內(nèi)。

. 在方孔上方1cm處垂直地拿著緩沖瓶。

. 在試劑盒底部的方孔內(nèi)加入2滴緩沖液。

. 加緩沖液的剛剛15分鐘后讀結(jié)果。

. 在測試區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)粉紅色線的痕跡就表明陽性結(jié)果。

. 超過15分鐘后讀取的結(jié)果將認(rèn)為是無效的，必須要重做。

錯誤的使用用法

1.加液時，瓶子不能水平。

2.加液時，瓶子不能接觸到樣品孔

質(zhì)量控制：

1.如果沒有出現(xiàn)對照線，則測試無效得重做。如果測試無效，則病人結(jié)果不能報告。

2.全血樣品可能會在視窗內(nèi)出現(xiàn)紅色的背景值。如果它沒有遮蓋住測試線則結(jié)果有效。

3. 質(zhì)量控制需要必須遵照當(dāng)?shù)氐?、州?或國家法律或委任書和你們實(shí)驗室標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量程序。建議用戶參照NCLSI C24-A和42 CFR 493.1202(c)中的合適的質(zhì)量控制實(shí)踐指導(dǎo) 

結(jié)果解釋：

登革熱初次感染表現(xiàn)為發(fā)熱后3~5天能檢測到IgM抗體。二次感染表現(xiàn)為感染發(fā)作后的1~2天特異性IgG水平升高，還經(jīng)常伴有IgM水平的升高。應(yīng)該結(jié)合IgM和IgG測試線來解釋結(jié)果。單獨(dú)的線分析可能不夠準(zhǔn)確。

C：對照線  M：IgM測試線  G：IgG測試線

初次感染

在IgM和對照區(qū)域出現(xiàn)粉紅色條帶

測試說明IgM抗體陽性，且表明有初次登革熱感染。

二次感染

在IgM、IgG和對照區(qū)域出現(xiàn)粉紅色條帶

測試說明IgM和IgG抗體陽性，且表明二次登革熱感染。

二次感染

在IgG和對照區(qū)域出現(xiàn)粉紅色條帶

測試說明IgG抗體陽性，且表明二次登革熱感染。

陰性

僅僅在對照區(qū)域出現(xiàn)粉紅色條帶

沒有檢測到IgM和IgG抗體。結(jié)果不能排除登革熱感染。如果懷疑有登革熱感染，則在3~4天后重新測試。

無效

在對照區(qū)域沒有出現(xiàn)粉紅色條帶

測試無效得重做。

測試的局限性：

1.一個單獨(dú)測試樣本的分析不能作為診斷的確診標(biāo)準(zhǔn)。

2.在早期感染和一些二次感染中， IgM抗體的可檢測水平可能很低。一些病人在感染后的頭7~10天可能不會產(chǎn)生可檢測到水平的抗體。只要癥狀還存在，我們就建議在*份樣本后的3~4天對病人重新進(jìn)行測試。

3. 和黃病毒屬出現(xiàn)血清學(xué)交叉反應(yīng)是常見的事（即在登革熱1，2，3，4型和圣路易腦炎、西尼羅河、日本腦炎、黃熱病病毒等之間）。

4.終的診斷應(yīng)建立在結(jié)合測試結(jié)果和其它臨床和實(shí)驗室發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)之上。

5. 不能用來做一般人群的篩查。陽性預(yù)值依賴于現(xiàn)存在病毒的可能性。只能對有臨床癥狀的病人進(jìn)行測試，或者有可疑暴露時。

6.抗體的繼續(xù)存在或不存在不能用來決定治療的成功與否。

7.從免疫抑制病人得來的結(jié)果解釋要慎重。

8.Z佳的測試結(jié)果來自發(fā)熱后的6~14天采集的樣本。

性能鑒定數(shù)據(jù)

靈敏性和特異性 

為了評估Panbio Dengue Duo Cassette的靈敏性和特異性，我們用血清、血漿和全血在內(nèi)部和馬來群島和斯里蘭卡獨(dú)立的試驗地點(diǎn)進(jìn)行了試驗。

血清

回顧性地選擇的樣本來自于馬來群島一個試驗點(diǎn)的臨床懷疑有登革熱感染的病人在住院后采集的冷凍的血清。一組血清包括30對初次登革熱感染病人的血清、30對二次感染病人的血清和80份經(jīng)實(shí)驗室測試是登革熱感染陰性病人的血清，對這些進(jìn)行了評估。登革熱診斷是建立在內(nèi)部IgM ELISA法和血凝抑制（HAI）

測試的基礎(chǔ)之上的，HAI是用滴度≥1:2560來定義二次感染的。結(jié)果概括見表1。

血漿

Panbio公司用208份血漿樣本對Panbio登革熱 Duo小盒的性能進(jìn)行了臨床研究。經(jīng)Panbio登革熱 Duo IgM 和 IgG 捕獲ELISA法認(rèn)定，這208份樣本包括93份血清陰性、32份初次感染和83份二次感染樣本。結(jié)果概括見表2。

全血

斯里蘭卡的一個研究所測試了331份全血和血清樣本，這些樣本來自于那些因符合登革熱感染體征和癥狀而送到醫(yī)院的病人。這組包括74份血清陰性、77份初次感染和180份二次感染樣本。用試劑盒內(nèi)提供的MicroSafe移液管采集手指血，用Panbio 登革熱Duo小盒來測試。在靜脈采集得到血清，再用Panbio登革熱Duo IgM 捕獲 和 IgG 捕獲 ELISA (E-DEN01D)來確定。測試結(jié)果與登革熱的血清狀況進(jìn)行比較以測定那方法用來測定全血樣本時的靈敏性，特異性和*性。結(jié)果概括見表3。

表1  Panbio登革熱Duo小盒靈敏性和特異性概括(血清) 研究地點(diǎn)-馬來群島

S1=*份血樣,S2=第二份血樣

a 12對急性血清樣本經(jīng)HAI滴度測定Den-2和Den-3≤ 10被去除，沒有計算了樣本數(shù)目內(nèi)。

95% CI*

相對血清靈敏性 = 104/108    96.3%     90.8 - 99.0%

相對血清特異性 = 76/80      95.0%     87.7 - 98.6%

相對血清*性 = 162/188    86.2%     81.2 - 91.1%

*CI = 可信區(qū)間 

表2 Panbio登革熱Duo小盒靈敏性和特異性概括(血漿) 研究地點(diǎn)-澳大利亞

95% CI*

相對血清靈敏性= 110/115    95.7%     92.9 - 98.4%

相對血清特異性= 77/93     82.8%     77.7 - 87.9%

相對血清*性= 178/208   85.6%     80.8 - 90.4%

*CI =可信區(qū)間

表3 Panbio登革熱Duo小盒靈敏性和特異性概括(全血) 研究地點(diǎn)-斯里蘭卡

95% CI*

相對血清靈敏性= 231/257    89.9%     86.2 - 93.6%

相對血清特異性= 66/74      89.2%     82.1 - 96.3%

相對血清*性= 274/331    82.8%     78.7 - 86.8%

*CI =可信區(qū)間

交叉反應(yīng)

通過測試一組208份來自其它確診病人（非登革熱）的血清來測定Panbio登革熱Duo小盒的診斷特異性。還測試了一組來自沒有證據(jù)表明感染的受試者的血清。結(jié)果概括參見表4。 

表4 Panbio登革熱Duo小盒交叉反應(yīng)性研究

重現(xiàn)性

為了測定Panbio登革熱Duo小盒的重現(xiàn)性，我們用3個批號的試劑盒在不同的3天對9份血清進(jìn)行測試。那9份血清代表了登革熱初次感染、二次感染和沒有感染，然后將那測試結(jié)果和參照結(jié)果進(jìn)行了比較。在15分鐘時讀取組內(nèi)和組間測試結(jié)果，并概括見表5。

表5 Panbio登革熱Duo小盒組內(nèi)和組間的重現(xiàn)性

P = 初次感染 S = 二次感染 N = 陰性

初次感染是建立在IgM陽性和IgG陰性讀數(shù)基礎(chǔ)之上的。二次感染是建立在IgG陽性和IgM陽性或陰性讀數(shù)基礎(chǔ)之上的。所有的對照線都是陽性的。

故障排除指導(dǎo)

公司優(yōu)勢：
1）質(zhì)量：我司提供的的試劑均經(jīng)過出廠檢測。產(chǎn)品質(zhì)量有保證。
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